คุณ เคย พยายาม กับ การ พัฒนา ใหม่ ใน การ ทดลอง ไหม? คุณ กําลัง หา ทาง แก้ไข เพื่อ รักษา สภาพ การ ปลูก เซลล์ ที่ เสมอ ได้ ไหม? คํา ตอบ อาจ อยู่ ใน การ ควบคุม ระบบ ผ่อน HEPES อย่าง แม่นยํา.HEPES (4- ((2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) เป็นสารพัดสนองที่สําคัญที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในงานวิจัยชีวเคมีและชีววิทยาโมเลกุลเป็นที่รู้จักด้วยความสามารถในการรักษาระยะ pH ของร่างกายในศูนย์เลี้ยงเซลล์และปฏิกิริยาทางอนิจไซม์

บทบาทสําคัญของ HEPES Buffer

ก่อนที่จะเข้าไปในวิธีการเตรียม มันสําคัญที่จะเข้าใจว่าทําไม HEPES จึงเป็นสารพัดพัดในงานห้องปฏิบัติการโซลชั่นเคมีนี้รักษาความมั่นคงของ pH - เป็นปัจจัยสําคัญในการทดลองทางชีววิทยา ที่ความสับสนเล็ก ๆ น้อย ๆ ของ pH สามารถส่งผลกระทบต่อผลได้อย่างสําคัญในพืชเซลล์, ความแตกต่างของ pH มีผลต่อการเติบโต, การเผาผลาญและการแตกต่าง, ในขณะที่ปฏิกิริยา enzymatic ขึ้นอยู่กับระดับ pH ที่แม่นยําสําหรับกิจกรรมที่ดีที่สุด.

เมื่อเทียบกับพัฟเฟอร์ฟอสเฟตแบบดั้งเดิม HEPES มีข้อดีที่ชัดเจน:

• ความสามารถระบายความร้อนที่ดีกว่า ภายในช่วง pH ของร่างกาย
• ความเป็นพิษต่อเซลล์ที่ต่ํากว่า ทําให้มันเหมาะสมสําหรับการนําไปใช้ในปลูกเซลล์
• ไม่มีการฝนด้วยไอออนโลหะ ทําให้การขัดแย้งกับกิจกรรมทางอินซิม

ระเบียบขั้นตอนสําหรับการเตรียม 1M HEPES Buffer

วัสดุที่ต้องการ:

• HEPES (กรดอิสระ): 119.15 กรัม
• น้ํากระป๋องหรือน้ําไม่ประกอบด้วยไอออน
• NaOH (เม็ดแข็ง)
• โซลูชั่น NaOH ที่มุ่งมั่น
• ถังที่เหมาะสม (ถ้วยแก้ว, กระปุกระดับ)
• เครื่องวัด pH ที่ปรับระดับ
• เครื่องเลื่อนหรือผสมแม่เหล็ก
• 0เครื่องกรองเชื้อเพลิง.22μm

ขั้นตอนการเตรียม:

1. 1การละลาย HEPES:เพิ่ม 119.15g HEPES ไปยังน้ํากระป๋องประมาณ 400mL ในถังที่เหมาะสม ผสมต่อเนื่องจนกระทั่งเกิดการละลายอย่างสมบูรณ์แบบ ส่งผลให้มีสารละลายใส
2. 2การปรับ pH เริ่มต้น:ขณะ stirring เพิ่ม NaOH pellets อย่างช้าช้าในขั้นเล็ก ๆ จน pH จะถึงประมาณ 68. ติดตามให้ดีด้วยเครื่องวัด pH เพื่อหลีกเลี่ยงการเกินระดับ. หมายเหตุ: ขั้นตอนนี้สร้างความร้อน - ใช้ด้วยความระวัง
3. 3การปรับระดับ pH อย่างแม่นยํา:เมื่อเข้าใกล้ pH 70, เปลี่ยนไปยังการเพิ่มละลาย NaOH สัมผัสตามระดับน้ําตกลงต่อไปจนกว่าจะบรรลุ pH ได้ถูกต้อง 70กระบวนการที่ละเอียดนี้รับประกันคุณภาพของพัฟเฟอร์
4. 4การปรับปริมาณสุดท้าย:โอนสารละลายไปในกล่องขนาด 500 ml และนํามาในขนาดด้วยน้ํากระป๋อง ผสมให้ละเอียดเพื่อให้มั่นใจว่ามีความเหมือนกัน
5. 5การกําจัดโรค:การกรองสารละลายผ่านผิว 0.22μm ลงในถังที่ไร้สารสกัด ขั้นตอนนี้กําจัดสารพิษจากจุลินทรีย์และขยายอายุการใช้งาน
6. 6- ที่เก็บของ:เลือกกระป๋องกันเชื้อเพลิงในถังขนาดเล็กและเก็บไว้ที่ 4 °C หลีกเลี่ยงการหมุนเวียนในการแข็งและหย่อนซ้ําเพื่อรักษาความสมบูรณ์แบบ

ข้อ พิจารณา ที่ สําคัญ:

• ใช้สารปฏิกิริยาความบริสุทธิ์สูงและน้ําเพื่อป้องกันการปนเปื้อน
• การปรับระดับ pH ต้องการเครื่องวัดระดับที่ถูกต้อง
• แนะนําให้กรองแบบไร้เชื้อเพลิงสําหรับการเก็บรักษานาน
• อัลลิควอตในปริมาณน้อยป้องกันการลดคุณภาพ

การใช้งานในวิจัยชีววิทยา

1M HEPES buffer มีวัตถุประสงค์หลายอย่างในสาขาวิชาชีววิทยา:

การปลูกเซลล์:รักษา pH ที่สมบูรณ์แบบในสื่อการเติบโต, สนับสนุนการขยายตัวและการทํางานของเซลล์

การศึกษาทางเอ็นไซม์ส่งผลให้เกิดสภาพที่มั่นคง สําหรับการวัดการเคลื่อนไหวของเอนไซม์ และการประกอบกิจกรรม

การทํางานของโปรตีน:สะดวกในการสกัดโปรตีน การทําความสะอาด และการเก็บรักษา ขณะที่รักษาความสมบูรณ์แบบทางโครงสร้าง

การวิจัยกรดนิวเคลิกป้องกัน DNA และ RNA ระหว่างการแยกและวิเคราะห์

การ ศึกษา กรณี: การ ปรับปรุง การ บันทึก ภาพ ใน รังสี

ระบบการถ่ายทอดใน vitro ขึ้นอยู่กับความมั่นคงของ pH สําหรับกิจกรรม RNA polymeraseการวิจัยแสดงให้เห็นว่าปฏิกิริยาที่ใช้ HEPES ปะกันผลิตปริมาณและคุณภาพ RNA ที่สูงกว่า เมื่อเทียบกับปะกันอื่นความสามารถของสารเคมีในการต่อต้านผลิตภัณฑ์ข้างเคียงที่มีกรด ช่วยรักษาสภาวะทางอนิจไมส์ที่ดีที่สุดในขณะที่ป้องกัน RNA ที่สังเคราะห์จากการทําลาย

สรุป

การเตรียมผง HEPES ระดับห้องปฏิบัติการ ต้องการความสนใจในรายละเอียด แต่ปฏิบัติตามโปรโตคอลที่ตรงไปตรงมานักวิจัยสามารถประกันความสอดคล้องในการทดลองการควบคุม pH อย่างแม่นยํายังคงเป็นสิ่งสําคัญในการผลิตผลงานทางวิทยาศาสตร์ที่น่าเชื่อถือและสามารถนํามาผลิตได้