जैव रासायनिक प्रयोगों की सटीक दुनिया में, यहां तक कि मामूली पीएच उतार-चढ़ाव पूरे अनुसंधान परियोजनाओं को खतरे में डाल सकते हैं। स्थिर प्रयोगात्मक परिस्थितियों को बनाए रखना सर्वोपरि है,वैज्ञानिकों को अपने मुख्य शोधों पर ध्यान केंद्रित करने की अनुमति देनाट्रि-बफर्ड सालिन (टीबीएस) इस महत्वपूर्ण स्थिर करने वाले एजेंट के रूप में कार्य करता है, जो जैव रासायनिक अनुप्रयोगों में एक अपरिहार्य भूमिका निभाता है।
ट्राइस-बफर किया हुआ खारा घोल एक व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला जैविक बफर समाधान है जिसे 7 और 9 के बीच स्थिर पीएच स्तर बनाए रखने के लिए डिज़ाइन किया गया है।2ट्रिस (ट्रिस (हाइड्रॉक्सीमेथिल) अमीनोमेथेन) और हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल) से बनी इस बफर प्रणाली में 25°C पर 8.07 का पीकेए होता है।शोधकर्ताओं को ध्यान देना चाहिए कि तापमान महत्वपूर्ण रूप से Tris के pKa मूल्य को प्रभावित करता हैइस प्रकार, पीएच अस्थिरता से बचने के लिए तापमान की सावधानीपूर्वक निगरानी आवश्यक है।
प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार टीबीएस सूत्र भिन्न होते हैं। विशिष्ट सांद्रता 100-200 एमएम सोडियम क्लोराइड (NaCl) और 5-100 एमएम ट्राइस-एचसीएल से भिन्न होती है, जिसमें पीएच 7.2-8 के बीच समायोजित किया जाता है।0एक मानक तैयारी में 150 एमएम NaCl और 50 एमएम Tris-HCl pH 7 पर होते हैं।6बफर टैबलेट या पूर्व-मापा पैकेट सहित वाणिज्यिक तैयारी केवल पानी में भंग करने की आवश्यकता के कारण प्रयोगशाला कार्यप्रवाह को सरल करती है।
टीबीएस के आइसोटोनिक और गैर विषैले गुण इसे कई जैव रासायनिक तकनीकों में अमूल्य बनाते हैंः
- वेस्टर्न ब्लोटिंग:झिल्ली धोने के बफर और एंटीबॉडी विरंजन दोनों के रूप में कार्य करता है, परिणाम सटीकता बढ़ाने के लिए प्रभावी रूप से अनबाउंड एंटीबॉडी और गैर-विशिष्ट रूप से बंधे प्रोटीन को हटा देता है।
- एलिसा:अनबाउंड एंटीजन/एंटीबॉडी को खत्म करने के लिए प्राथमिक वॉश बफर के रूप में कार्य करता है, पृष्ठभूमि शोर को कम करता है और पता लगाने की संवेदनशीलता में सुधार करता है।
- सेल कल्चरःविकास के माध्यम में इष्टतम पीएच बनाए रखता है, कोशिका स्वास्थ्य और कार्य का समर्थन करता है।
- प्रतिरक्षा हिस्टोकेमिकलःऊतक के खंडों से अनबाउंड एंटीबॉडी को हटाकर रंगाई विशिष्टता को बढ़ाता है।
- प्रवाह साइटोमेट्रीःधोने और सस्पेंशन प्रक्रियाओं के दौरान कोशिका अखंडता बनाए रखता है।
जबकि टीबीएस मूल रूप से विश्वसनीय है, शोधकर्ताओं को निम्नलिखित सावधानियों का पालन करना चाहिएः
- तापमान संवेदनशीलता:पर्यावरण की स्थितियों में उतार-चढ़ाव होने पर स्थिर तापमान बनाए रखें या पीएच को फिर से कैलिब्रेट करें।
- पीएच सत्यापन:हमेशा ठीक से कैलिब्रेट किए गए मीटरों का उपयोग करके पीएच मानों की पुष्टि करें।
- भंडारणःसमाधान को ठंडे, अंधेरे स्थानों पर रखें; रेफ्रिजरेटेड स्टॉक का तुरंत उपयोग किया जाना चाहिए।
- दूषित होने से रोकथामतैयारी के दौरान निष्फल उपकरण और कंटेनरों का प्रयोग करें।
जबकि टीबीएस प्रमुख बना हुआ है, कुछ अनुप्रयोगों के लिए वैकल्पिक बफर की आवश्यकता हो सकती हैः
- फॉस्फेट-बफर्ड खारा घोल (पीबीएस):उच्च तापमान स्थिरता प्रदान करता है लेकिन एंजाइम सक्रियता में हस्तक्षेप कर सकता है।
- हेपेस:कम से कम सेलुलर विषाक्तता के साथ उत्कृष्ट बफरिंग क्षमता प्रदान करता है, हालांकि संकीर्ण पीएच रेंज के भीतर।
- साइट्रेट बफर:अम्लीय परिस्थितियों के लिए आदर्श है लेकिन धातु आयनों के साथ बातचीत कर सकता है।
ट्रि-बफर्ड सालसिन जैव रासायनिक अनुसंधान में एक आवश्यक उपकरण के रूप में खड़ा है, पुनः प्रयोज्य वैज्ञानिक खोज के लिए आवश्यक स्थिर वातावरण प्रदान करता है।आवेदन, और सीमाओं के कारण, शोधकर्ता प्रयोगात्मक परिणामों को अनुकूलित कर सकते हैं। बफर चयन में हमेशा क्षमता, स्थिरता,और जैविक संगतता.
