در دنیای دقیق آزمایشات بیوشیمی، حتی نوسانات کوچک pH می تواند کل پروژه های تحقیقاتی را به خطر بیندازد.اجازه دادن به دانشمندان برای تمرکز بر تحقیقات اصلی خودمحلول نمکی با بافر تریس (TBS) به عنوان این عامل ثبات بخش حیاتی عمل می کند و نقش اساسی در کاربردهای بیوشیمیایی ایفا می کند.
محلول نمکی با بافر تریس یک محلول بافر بیولوژیکی به طور گسترده ای استفاده می شود که برای حفظ سطوح ثابت pH بین 7 و 9 طراحی شده است.2این سیستم بافر متشکل از Tris (tris ((hydroxymethyl) aminomethane) و اسید هیدروکلوریک (HCl) ، دارای pKa 8.07 در 25 °C است.محققان باید توجه داشته باشند که دمای به طور قابل توجهی بر ارزش pKa تریس تاثیر می گذارددر نتیجه، نظارت دقیق بر دمای هوا برای جلوگیری از بی ثباتی pH ضروری است.
فرمول های TBS با توجه به الزامات تجربی متفاوت است. غلظت های معمولی از 100-200 mM کلرید سدیم (NaCl) و 5-100 mM Tris-HCl با pH تنظیم شده بین 7.2-8.0یک داروی استاندارد شامل 150 mM NaCl و 50 mM Tris-HCl در pH 7 است.6داروهای تجاری از جمله قرص های بافری یا بسته های پیش اندازه گیری شده جریان کار آزمایشگاه را ساده می کنند زیرا فقط به محلول در آب نیاز دارند.
خواص ایزوتونیک و غیر سمی TBS آن را در چندین تکنیک بیوشیمیایی ارزشمند می کند:
- "واسترن بلاتینگ":عملکرد آن ها به عنوان یک بافر شستن غشا و رقیق کننده آنتی بادی است که به طور موثر آنتی بادی های غیر متصل و پروتئین های غیر مرتبط را برای افزایش دقت نتایج حذف می کند.
- اليزا:به عنوان یک بافر شستشوی اولیه برای از بین بردن آنتی ژن ها / آنتی بادی های غیر مرتبط، کاهش نویز پس زمینه و بهبود حساسیت تشخیص عمل می کند.
- کشت سلولی:pH مطلوب را در محیط رشد حفظ می کند، از سلامت و عملکرد سلولی حمایت می کند.
- ايمونهيستوکيميا:با حذف آنتی بادی های بسته نشده از بخش های بافت خاصیت رنگ را افزایش می دهد.
- سیتومتری جریان:حفظ یکپارچگی سلول در طول شستشوی و تعلیق.
در حالی که TBS اساسا قابل اعتماد است، محققان باید این احتیاط ها را رعایت کنند:
- حساسیت به دما:دمای ثابت را حفظ کنید یا pH را در صورت نوسانات محیط تغییر دهید.
- بررسی pH:همیشه ارزش های pH را با استفاده از مترهای به درستی کالیبر شده تأیید کنید.
- ذخیره سازی:محلول ها را در مکان های سرد و تاریک نگه دارید؛ مخازن یخچال باید بلافاصله استفاده شود.
- پیشگیری از آلودگی:در طول آماده سازی از تجهیزات و ظروف استریل استفاده کنید.
در حالی که TBS همچنان غالب است، برخی از برنامه ها ممکن است نیاز به بافر های جایگزین داشته باشند:
- محلول نمکی با فوسفات (PBS):ثبات درجه حرارت بالاتری را ارائه می دهد اما ممکن است فعالیت آنزیم را مختل کند.
- هپز:قابلیت بافری عالی با حداقل سمی بودن سلولی، اگرچه در محدوده pH باریک تر است.
- بافرهای سیترات:برای شرایط اسیدی ایده آل است اما ممکن است با یون های فلزی تعامل داشته باشد.
محلول نمکی با بازتاب تریس به عنوان یک ابزار ضروری در تحقیقات بیوشیمیک شناخته می شود، محیط پایدار لازم برای اکتشافات علمی قابل تکرار را فراهم می کند.برنامه های کاربردی، و محدودیت ها، محققان می توانند نتایج تجربی را بهینه کنند. انتخاب بافر همیشه باید الزامات روش شناسی خاص مربوط به ظرفیت، ثبات،و سازگاری بیولوژیکی.
